对人腹膜间皮细胞(hpmcs)透明质酸合成酶的调节作用及对透明质酸(ha)合成的影响,分离培养的第2代人腹膜间皮细胞(hpmcs)消化后传入6孔培养板,将细胞随机分为5组(每组6个样本):正常对照组(对照组);90mmol/l葡萄糖组(高糖组);30mmol/l葡萄糖组(低糖组);5葡聚糖组(葡聚糖)及90mmol/l甘露醇组(甘露醇组)。继续培养24小时,提取总rna,以rt-pcr法检测has-2mrna和has-3mrna的表达;收集细胞培养上清液,以放射免疫法检测ha浓度;以微粒排除法观察细胞基质的面积,结果如下:
高糖组、低糖组、葡聚糖组、甘露醇组has-2mrna的表达均较对照组明显增加(p值均<0.05);高糖组has-3mrna的表达亦明显增加(p<0.05),低糖组、葡聚糖组、甘露醇组has-3mrna与对照组无明显差异(p>0.05),甘露醇组has-3mrna表达较对照组减弱(p<0.05)。各实验组细胞胞衣结构面积与细胞体面积的比值无显著差异(p值均>0.05)。对照组、高糖组、低糖组、葡聚糖组、甘露醇组细胞培养上清液ha的浓度均显著高于对照组(p值均<0.05);高糖组ha浓度显著高于低糖组、葡聚糖组和甘露醇组(p<0.05)。
因此与高浓度葡萄糖相比,葡聚糖虽增强hpmcshas-2mrna表达,但对hpmcs的has-3mrna无影响,提示其主要促进大分子透明质酸的合成,因而更接近hpmcs的生理状态。这一作用与渗透压可能无关。
3.不同分子量透明质酸(ha)对人腹膜间皮细胞(hpmcs)透明质酸合成酶的调节作用
分离培养的第2代人腹膜间皮细胞(hpmcs)消化后传入6孔培养板,将细胞随机分为3组(每组6个样本):正常对照组(对照组);高分子量透明质酸组(分子量为1,600,000道尔顿,浓度0.01,hha组);低分子量透明质酸组(分子量为280,000道尔顿,浓度0.01,lha组)。继续培养24小时后,提取总rna,以rt-pcr法检测has-2mrna和has-3mrna的表达;微粒排除法观察细胞基质的面积,结果如下:
lha组has-2mrna及has-3mrna表达均较对照组增强(p值均〈0.05〉。hha组has-2mrna表达较对照组增强,而has-3mrna表达与对照组无显著差异。lha对has-3mrna表达增强作用是其对has-2mrna作用的4.8倍和1.025倍。
这提示lha和hha均促进hpmcshas-2mrna表达,lha对has-3mrna表达也有增强作用,而hha则没有这一作用。因此,从选择腹膜保护剂的角度分析,我们倾向于选择更具生物相容性hmw-ha。
综合以上结果,我们得出以下结论:
1.大鼠慢性腹膜透析模型中多次重复使用透明质酸,可以防止由于长期使用以葡萄糖为渗透压制剂的腹膜透析液所引起的腹腔吸收率增加,增加超滤量,保护腹膜功能。
2.通过电镜研究证实(1)正常大鼠的腹膜表面覆盖了一层假膜结构(即腹膜表面活性层)。(2)这一表面活性层中含有透明质酸,并可能含磷脂。
3.has-2是hpmcs透明质酸合成和细胞细胞衣样结构形成的要害酶。正常生理状态下,人腹膜间皮细胞以催化合成大分子量透明质酸为主。
4.炎症因子l、tnf-α、il-1β均使hpmcs合成ha增加。由于其对has-3mrna表达的促进作用是主要的,故其主要促进低分子透明质酸的合成。
5.高浓度葡萄糖(90mmol/l),低浓度葡萄糖(30m
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