射。第8天进行4h腹膜功能实验并于不同时点留取血和腹透液样品进行分析。结果如下:
高糖组和透明质酸组的腹腔内容积(ipv)显著低于正常对照组(p值均<0.01);然而,透明质酸组ipv仍显著高于高糖组(p<0.01)。高糖组腹腔液体吸收率(ke)显著高于正常对照组和透明质酸组(p<0.05),而后两者差异无显著性。高糖组和透明质酸组的淋巴液体吸收率(keb)均显著高于对照组(p<0.05)。高糖组的组织间质吸收率(ket)显著高于对照组和透明质酸组,后两者无显著差异。葡萄糖d/d0值和腹腔透析液渗透压值,高糖组均显著低于对照组和透明质酸组(p<0.01);对照组和透明质酸组无明显区别(p>0.05)。高糖组尿素﹑钠﹑总蛋白d/p值均显著高于其他两组(p均<0.01,);钾的d/p值各组间差异无显著性。高糖组尿素氮清除率明显低于其它两组(p<0.05);高糖组蛋白质清除率明显高于其它两组(p<0.05)。高糖组葡萄糖,尿素,钠,钾和总蛋白弥散转运系数(kbd)均显著高于其他两组相应值。
这一结果提示高糖透析液可引起腹膜通透性增高,而持续性应用透明质酸可以防止高糖引起的腹膜通透性增
高。
二.[1]腹膜表面超微结构的观察及透明质酸的免疫电镜研究
为证实大鼠腹膜表面活性层存在并探讨其可能组成成分,从4只sd大鼠取正常的大鼠腹膜组织,分别采用下列固定方法固定24小时:(1)2.5戊二醛和2多聚甲醛(对照组);(2)2.5%戊二醛和0.5氯化十六烷基吡啶(gag组),后者用于固定葡糖胺聚糖;(3)2%oso4用于固定磷脂(ph1组);(4)4%oso4(ph2组);(5)3鞣酸(鞣酸组)。漂洗后,gag组以2oso4,ph1、ph2组以2.5戊二醛及0.25鞣酸,鞣酸组以1oso4作后固定处理。标本以梯度浓度的酒精及丙酮脱水处理,以epon812包埋,超薄切片,以透射电镜(hitachi-600)观察。为证实腹膜表面层中存在透明质酸,将12个200目镍网分别轻轻接触大鼠腹膜表面2秒后进行固定:甲醛蒸汽5min,400c烤箱30min,t冲洗15min×3次;然后行透明质酸(ha)免疫电镜检查,其中6个以t代替ha一抗作为阴性对照组,另6个为实验组。结果如下:
在对照组中,可见腹膜间皮层表面的微绒毛而未观察到腹膜表面液体层。gag组中,在腹膜表面可观察到一层不连续的无定形结构层。ph1组中,一层连续的无定形结构覆盖于腹膜表面,它们的厚度与微绒毛的疏密相关。这一层在ph2组中被较好的保存,最厚处达到10μm。鞣酸组中,不但可以清楚见到此层,而且在此层及间皮细胞中还可以见到多量的类板层小体。
透明质酸免疫电镜研究发现:实验组可见网格状腹膜表面层结构,并见阳性信号;对照组未见阳性信号。
这提示正常大鼠腹膜表面存在一模样结构,该层中含有透明质酸并可能含有磷脂。
三.透明质酸合成酶(has)在人腹膜间皮细胞(hpmcs)细胞外基质/细胞衣样结构(matrixorextracellularcoatorhyaluronancontainingcoat)合成中的作用
为确定三种透明质酸合成酶(has)中,那一种是人腹膜间皮细胞(hpmcs)合成透明质酸(ha)及细胞胞衣样结构形成的要害酶,取进行腹腔外科手术的非尿毒症捐献者的大网膜组织,分离腹膜间皮细胞进行培养。提取细胞总rna,以半定量rt-pcr法检测正常培养人腹膜间皮细胞(hpmcs)三种透明质酸合成酶has-1、has-2、has-3mrna水
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